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對應法規：化妝品衛生規范2007
CNAS認可項目：是

1 范圍本規范規定了測定化妝品中雌三醇等7 種性激素的高效液相色譜-二極管陣列檢測器法、高效液相色譜-紫外檢測器/熒光檢測器法和氣相色譜/質譜鑒定法。本規范適用于化妝品中雌三醇等7 種性激素的檢測和鑒定。第一法高效液相色譜-二極管陣列檢測器法 2 方法提要以有機溶劑提取化妝品中的性激素，用高效液相色譜儀進行分析，以保留時間和紫外吸收光譜圖或熒光光譜圖定性，以峰面積進行定量。各激素的檢出限及取1g 樣品時的檢出濃度見表1。表1 各激素的檢出限和檢出濃度激素組分雌三醇雌酮己烯雌酚雌二醇睪丸酮甲基睪丸酮黃體酮檢出限，μg 0.02 0.04 0.01 0.02 0.002 0.002 0.003 檢出濃度，μg/g 40 80 20 40 4 4 6 3 試劑本標準所用試劑除另有說明外，均為優級純試劑。 3.1 甲醇。 3.2 飽和氯化鈉溶液。 3.3 環己烷。 3.4 硫酸 [?（H2SO4）＝2％]：取硫酸（ρ20＝1.84g/mL）2mL，緩慢加入到98mL 水中，混勻。 3.5 激素標準溶液 3.5.1 雌激素標準溶液[ρ（雌酮、雌二醇、雌三醇、己烯雌酚）＝2g/L]：分別稱取雌酮、雌二醇、雌三醇、己烯雌酚各0.200g，用少量甲醇（3.1）溶解，移至100mL 容量瓶中，用甲醇稀釋到刻度。 3.5.2 雄激素標準溶液[ρ（睪丸酮、甲基睪丸酮）＝600mg/L]：分別稱取睪丸酮、甲基睪丸酮各0.600g，用少量甲醇（3.1）溶解，轉移至100mL 容量瓶中，用甲醇稀釋到刻度。1mL 此溶液含以上兩種雄激素6.00mg。移取此標準溶液10.0mL 置于100mL 容量瓶中，用甲醇（3.1）稀釋到刻度。 3.5.3 孕激素標準溶液[ρ（黃體酮）＝600mg/L]：稱取黃體酮0.600g，用少量甲醇（3.1）溶解，轉移至100mL 容量瓶中，用甲醇稀釋到刻度。1mL 此溶液含孕激素6.00mg。移取此標準溶液10.0mL 置于100mL 容量瓶中，用甲醇（3.1）稀釋到刻度。 221 3.5.4 混合標準使用溶液：分別移取雌激素標準溶液（3.5.1）50.0mL，雄激素標準溶液（3.5.2） 5.00mL 和孕激素標準溶液（3.5.3）5.00mL 置于100mL 容量瓶中，用甲醇（3.1）稀釋到刻度。1mL 此溶液分別含4 種雌激素各1.00mg、2 種雄激素各30.0μg 和1 種孕激素30.0μg。 4 儀器 4.1 高效液相色譜儀，具等容泵、二極管陣列檢測器或熒光檢測器。 4.2 離心機。 4.3 具塞比色管，10mL。 5 分析步驟 5.1 樣品預處理 5.1.1 溶液狀樣品：準確稱取樣品1g～2g 于10mL 具塞比色管中，在水浴上餾除乙醇等揮發性有機溶劑，用甲醇（3.1）稀釋到10mL，備用。 5.1.2 膏狀、乳狀樣品：準確稱取樣品1g～2g 于100mL 錐形瓶中，加入飽和氯化鈉溶液（3.2） 50mL，硫酸（3.4）2mL，振蕩溶解后轉移至100mL 分液漏斗。以環己烷（3.3）30mL 分三次萃取，必要時離心分離。合并環己烷并在水浴上餾除。用甲醇（3.1）溶解殘留物，轉移到10mL 具塞比色管中，用甲醇稀釋到刻度。混勻后，經0.45μm 濾膜過濾，濾液備用。 5.2 色譜參考條件色譜柱：C18 柱，250×4.6mm，10μm；檢測波長：二極管陣列檢測器（雌性激素－204nm，雄性激素－245nm）或熒光檢測器（激發波長280nm，發射波長310nm）；流動相：甲醇+水=60+40；流速：1.3mL/min； 5.3 校準曲線的制備移取激素標準使用溶液（3.5.4）0.00、1.00、2.00、5.00mL 置于10mL 具塞比色管中，用甲醇（3.1）稀釋到刻度。調節儀器到最佳狀態，取樣5μL 注入高效液相色譜儀，以標準品的峰面積繪制校準曲線。 5.4 測定取待測溶液5μL 注入高效液相色譜儀，根據峰的保留時間和紫外吸收光譜圖或熒光光譜圖定性，根據峰面積從曲線上查出待測溶液中激素的質量濃度。 6 計算 ρ×V ω（激素）= m 式中：ω（激素）——樣品中激素的質量分數，μg/g； ρ——從曲線上查出測試溶液中激素的質量濃度，mg/L； V——樣品定容體積，mL； m——樣品取樣量，g。 222 7 色譜圖第二法高效液相色譜-紫外檢測器法/熒光檢測器法 8 方

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